SPOS
Savez pčelarskih organizacija Srbije

Познато је да Погон ”Наш мед” уз подршку Фонда за иновациону делатност већ неко време ангажује Хемијски факултет из Београда да за њега спроведе одговарајућа научна истраживања везана за квалитет меда са циљем дефинисања особина нашег меда, а све пре свега у сврху научне потврде квалитета меда из стандарда квалитета ”Добра пчеларска пракса” ради његове промоције.

О претходним истраживањима смо вас већ обавештавали. Сада је дошло време да вас известимо о програму иновационог ваучера број 1268. 

Захваљујемо се Фонду за иновациону делатност и Иновационом центру Хемијског факултета у Београду на сарадњи! 

Представљамо вам извод из завршног извештаја Иновационог центра Хемијског факултета у Београду: 

 

 

На основу Финансијске понуде број 261/1 од 16. 12. 2022. године и одговарајућег Уговора о пружању услуге закљученог између Иновационог центра Хемијског факултета у Београду д.о.о. (ИЦХФ), као Пружаоца услуге, и Погона за прикупљање и пласман меда пчелара СПОС-а „Наш мед“ д.о.о. као Наручиоца, након извршене услуге у складу са пројектом „Развој аналитичког поступка за оцену биолошке активности меда“ одобреним према Јавном позиву за додељивање иновационих ваучера Фонда за иновациону делатност, подносимо Наручиоцу

 

 

ЗАВРШНИ ИЗВЕШТАЈ

 

1. Уводне напомене

 

Предмет пројекта „Развој аналитичког поступка за оцену биолошке активности меда“ био је одређивање садржаја укупних полифенола и антиоксидативне активности статистички значајног броја узорака за СПОС најзначајнијих врста меда у циљу оцене њихове биолошке активности и бенефита по здравље, односно истицање вишег квалитета меда из Погона за прикупљање и пласман меда пчелара СПОС-а „Наш мед“ д.о.о.

Познато је да је мед специфична намирница изузетне нутритивне вредности, али и израженог биолошког дејства која се, захваљујући томе, од давнина користи и као храна и као лек. У научној и стручној литератури се могу наћи бројни подаци о антиоксидативном, антимикробном, антиинфламаторном и имунопротективном дејству различитих врста меда.

У хемијском смислу мед је веома сложена смеша великог броја различитих супстанци међу којима доминирају нижи шећери и вода. Поред глукозе, фруктозе и сахарозе мед садржи мале количине олигосахарида, органских киселина, аминокиселина, минерала, ензима и различитих фенолних једињења. Параметри квалитета меда су дефинисани одговарајућим прописима, Правилником о квалитету меда и других производа пчела (Сл. гласник РС, бр. 101/15), као и ЕУ директивом 2001/110/EC (European Economic Community (2002). EEC Council directive of 20 December 2001 relating to honey. Official Journal of the European Communities, 110, 47–50). Међутим, ови прописи не укључују параметре биолошке активности меда, односно његове антиоксидативне активности која је условљена хемијским саставом меда, пре свега количином и врстом присутних фенолних супстанци (флавоноида, фенолних киселина и њихових деривата).

Квалитет, хемијски састав и својства, укључујући и биолошку активност меда, у великој мери зависе од његовог биљног порекла, климатских услова, врсте пчела, сезоне и подручја прикупљања као и примењене пчеларске праксе. Мед који доминантно потиче од нектара једне биљне врсте назива се монофлорални а онај који је настао прикупљањем нектара већег броја биљака је полифлорални мед. Захваљујући погодним климатским условима и разноликости биљних врста, српски мед је високог квалитета и као такав потенцијално значајан не само за домаће већ и за европско, односно светско тржиште. Економски значајне врсте меда са подручја Србије су монофлорални медови од багрема, липе и сунцокрета као и полифлорални мед. С обзиром да управо полифлорални мед има значајно место не само у исхрани већ и у апитерапији, одабран је за испитивање у оквиру овог пројекта чији је предмет развој аналитичког поступка за оцену биолошке активности меда одређивањем садржаја укупних полифенола и антиоксидативне активности. Планирано је и у оквиру пројекта  реализовано испитивање тридесет узорака полифлоралног меда из Погона за прикупљање и пласман меда пчелара СПОС-а „Наш мед“. Ови су узорци прикупљени од пчелара укључених у систем добре пчеларске праксе. Географско порекло као и припадност прикупљених узорака полифлоралном меду процењена је од стране пчелара према локацији кошница, као и на основу карактеристичног изгледа, мириса и укуса меда. 

 

Б. Резултати и дискусија

Ранија испитивања полифенолног профила различитих узорака меда из Србије (Kečkeš, S., Gašić, U., Ćirković Veličković, T., Milojković-Opsenica, D., Natić, M., & Tešić, Ž. (2013). Food Chemistry, 138(1), 32–40; U. Gašić, S. Kečkeš, D. Dabić, J. Trifković, D. Milojković-Opsenica, M. Natić, Ž. Tešić,  Food Chemistry  145, 2014, 599-607)  показала су да у њима доминирају фенолне киселине, пре свега елагинска и пара-кумаринска киселина, и флавоноиди који потичу из прополиса као што су галангин, пиноцембрин, пинобаксин, као и кверцетин, односно рутин. У оквиру развоја поступка за одређивање антиоксидативног капацитета узорака полифлоралног меда, односно садржаја укупних полифенола (енг. total phenolic content, TPC) и антиоксидативног потенцијала (radical-scavenging activity, RSA), најпре је оптимизацијом услова разрађен поступак за најефикаснију екстракцију полифенолних једињења из узорака меда. У том циљу је одабран и незнатно модификован поступак који су предложили Меда и сарадници (Meda et al., Food Chemistry, 91(3), 2005, 571–577). Узорак меда (5 g) растворен је у 15 ml ултрачисте воде. Раствор је 15 минута хомогенизован на собној температури у ултразвучном купатилу, након чега је у одмерном суду допуњен ултрачистом водом до запремине од 50 ml. На овај начин припремљен раствор филтриран је кроз PTFE мембранске филтере од 0,45 μm је коришћен за испитивања садржаја укупних полифенола и антиоксидативног потенцијала.

У оквиру овог пројекта развијенa је методa за испитивање садржаја укупних полифенола у узорцима полифлоралног меда. Спектрофотометријско одређивање по Фолин-Чикалтеу (Folin-Ciocalteu) методи је модификовано како би услови били прилагођени испитиваним узорцима. Екстракт полифлоралног меда (0,3 ml) разблажен је са 6 ml дејонизоване воде и потом помешан са 0,5 ml раствора Фолин-Чикалтеу реагенса. Тако припремљен раствор инкубиран је 6 минута на собној температури а затим му је додато 3 ml 20% раствора натријум-карбоната. Припремљени узорци су остављени да  стоје 30 минута на 40 °C и потом је мерена апсорбанција на 765 nm. Раствори галне киселине у концентрацијама од 50, 100, 150, 200 и 250 μg/ml коришћени су као стандарди, а смеша воде и реагенса као слепа проба (бланк). Резултати су изражени као mg еквивалента галне киселине по граму меда. Добијени резултати су приказани у Табели 1.

Табела 1. Садржај укупних полифенола и антиоксидативни потенцијал полифлоралног  меда.

Р. број	TPC (mg/g)	RSA (%)
1	0,87	14,76
2	0,67	9,04
3	1,04	12,11
4	0,73	12,22
5	0,57	9,44
6	0,92	11,86
7	0,98	11,18
8	0,77	13,29
9	0,51	3,13
10	0,64	10,98
11	0,83	17,10
12	0,74	5,78
13	0,70	8,86
14	0,57	8,78
15	0,42	3,68
16	0,76	7,97
17	0,4	3,43
18	0,37	1,45
19	0,67	9,04
20	1,16	18,49
21	1,19	15,01
22	0,55	4,45
23	0,43	3,01
24	0,51	4,23
25	0,53	6,07
26	1,12	13,66
27	0,5	2,29
28	0,39	1,96
29	0,58	9,44
30	0,63	13,03
Средња вредност	0,69	8,86
Опсег	0,37 – 1,19	2,29 – 18,49

Развој аналитичког поступка за одређивање антиоксидативног потенцијала екстраката меда заснован је на модификацији методе из литературе (Li, H., Wang, X., Li, P., Li, Y., & Wang, H. (2008). Journal of Food and Drug Analysis, 16(6), 67–73). Запремини од 1 ml екстракта меда додато је 3 ml метанолног раствора DPPH· (71 mM). Овако припремљени раствори остављени су да стоје у мраку 60 минута како би се добиле стабилне вредности апсорпције. Смањење концентрације DPPH· праћено је смањењем апсорпције на 515 nm. Антиоксидативни потенцијал израчунат је као проценат обезбојења DPPH помоћу следеће једначине:

где је ADPPH апсорбанција метанолног раствора радикала DPPH·, а Aузорка апсорбанција у присуству екстракта меда.

Сва мерења урађена су у трипликату, а резултати приказани у Табели 1 су средње вредности три паралелна одређивања.

Као што се може видети из Табеле 1, узорци испитивани у оквиру овог пројекта имали су садржај укупних полифенола у опсегу 0,03 – 1,39 mg галне киселине по граму меда са средњом вредношћу 0,69 mg GAЕ/g меда. Овакав садржај укупних полифенола је у сагласности са вредностима које су доступне у литератури за медове из региона. Примера ради, испитивање које је обухватило десет узорака цветног меда из Словеније (Bertoncelj, Doberšek, Jamnik, & Golob, 2007, Food Chemistry, 105(2), 822–828) показало је просечну вредност од 0,157 mg галне киселине по граму меда. Такође, цветни мед из Румуније (Dobre, Gâdei, Pätraşcu, Elisei, & Segal, 2010, The Annals of the University Dunarea de Jos of Galati Fascicle VI–Food Technology, 34(2), 67–73) имао је садржај од 0,491 mg галне киселине по граму меда. Садржај укупних полифенола за седам испитиваних узорака полифлоралног меда из Хрватске (Piljac-Žegarac, Stipčević, & Belščak, 2009, Journal of ApiProduct and ApiMedical Science, 1(2), 43–50) био у опсегу 0,126 – 0,906 mg еквивалената галне киселине по граму меда.

Вредности RSA утврђене за узорке полифлоралног меда испитиване у оквиру овог пројекта биле су у опсегу 2,29 – 18,49%. Поред тога, утврђена је добра линеарна зависност између ТРС и RSA (r > 0.80) што значи да су укупни полифеноли, односно фенолне киселине и флавоноиди из меда одговорни за његов антиоксидативни потенцијал.

 

В. Закључно мишљење и препоруке

На основу свега изложеног евидентно је да је у оквиру овог пројекта развијен  поступак за оцену биолошке активности полифлоралног меда из погона „Наш мед“,  који обухвата одређивање садржаја укупних полифенола и антиоксидативног потенцијала меда као и коефицијента њихове линеарне корелације. Одговарајући аналитички поступци у облику стандардних радних процедура ће бити дати на захтев Наручиоцу када обезбеди техничке и кадровске могућности за извођење потребних анализа.

С обзиром да је у оквиру пројекта утврђена значајна биолошка активност испитиваних узорака полифлоралног меда, упоредива а у неким случајевима израженија у односу на узорке из региона, наведени параметри се могу користити као показатељи вишег квалитета меда из погона „Наш мед“ у циљу његове промоције на тржишту.

На крају, али не мање важна је и могућност оцене аутентичности меда на основу параметара његове биолошке активности одређене по поступку развијеном у оквиру овог пројекта што је од посебног значаја за сузбијање појаве фалсификата на тржишту меда.

Процедура развијена у оквиру овог пројекта за полифлорални мед може се применити и на друге врсте меда и у наставку систематских испитивања биолошке активности меда могу се дефинисати стандарди квалитета за одређене ботаничке врсте меда.

Пројекат је реализован у складу са спецификацијом датом у Финансијској понуди приликом пријаве Пројекта и Уговором о пружању услуге.

 

У Београду, 1. 8. 2023.